NCTC clone 929 细胞,也被称为 L-929 细胞,是一种常用的成纤维细胞系,在生物医学研究领域应用广泛。以下是其详细培养步骤:
前期准备:
细胞培养需在无菌环境中进行,准备好超净工作台,并提前紫外照射消毒 30 分钟以上。培养器具如培养瓶、移液管、离心管等均需高压灭菌处理。选择合适的培养基,一般为含 10% - 15% 胎牛血清的 MEM 培养基,添加适量的青霉素(100 U/mL)和链霉素(100 μg/mL)以防止细菌污染,还可加入 2 mM 的 L - 谷氨酰胺维持细胞生长所需营养。
细胞复苏:
从液氮中取出冻存的 NCTC clone 929 细胞,迅速放入 37℃水浴锅中,轻轻晃动,使其在 1 - 2 分钟内快速解冻。将解冻后的细胞悬液转移至含有预热培养基的离心管中,1000 rpm 离心 5 分钟,弃去上清液,用新鲜培养基重悬沉淀,接种于培养瓶中,置于 37℃、5% CO?培养箱中培养。
细胞传代:
当细胞在培养瓶中生长至 80% - 90% 汇合度时,需进行传代。先弃去旧培养基,用 PBS 缓冲液轻轻冲洗细胞 2 - 3 次,去除残留的培养基和血清。加入适量的胰蛋白酶 - EDTA 消化液,覆盖瓶底,在显微镜下观察,当细胞变圆、间隙增大时,立即加入含血清的培养基终止消化。将细胞悬液转移至离心管,1000 rpm 离心 5 分钟,沉淀用新鲜培养基重悬后,按合适比例传代至新的培养瓶中,放回培养箱继续培养。
细胞冻存:
取对数的细胞,消化离心后,用冻存液(含 20% 胎牛血清、10% DMSO 的培养基)重悬,调整细胞密度至 1 - 5 × 10?/mL,分装入冻存管中,标记好细胞名称、代数、冻存日期等信息。将冻存管先置于 4℃冰箱 30 分钟,再转入 - 20℃冰箱 2 小时,接着放入 - 80℃冰箱过夜,转移至液氮中保存。
培养注意事项:
培养过程中要定期观察细胞形态和生长状态,若发现细胞有污染迹象(如培养基浑浊、细胞形态异常等),应立即丢弃并排查污染源。传代时操作要轻柔,避免过度消化导致细胞损伤。同时,要保证培养箱内的温湿度和 CO?浓度稳定,为细胞提供良好的生长环境。
原创作者:上海富衡生物科技有限公司