细胞就像是我们的孩子，每一步都需要精心呵护，在对于不准备做实验、长时间不使用的细胞，我们就要将他们保存起来，俗称冻存。
但是如果冻存不到位，就很有可能会伤害到细胞，导致死细胞过多或者直接死亡，如何进行高活率的冻存尤其关键。
细胞的生长特性一般分为贴壁、悬浮和半贴壁，他们的冻存操作也有些许不同，让我们一起来看一下。
01、贴壁细胞冻存步骤
1、将需要冻存的细胞去上清
2、用PBS润洗一下贴壁细胞
3、去上清，加入适量胰酶，进行消化（在这过程中时刻关注消化进度）
4、将消化下来的细胞用完全培养基终止消化，放入15ml离心管中
5、离心1000rpm，5min，离心好后去上清，收集细胞沉淀
6、加入适量的无血清冻存液，将细胞沉淀吹匀分装到2ml的冻存管中
7、直接将装有细胞的冻存管放入-80冰箱
8、48小时后可转入液氮罐中保存
02、悬浮细胞冻存步骤
1、将需要冻存的细胞悬液放入15ml离心管中
2、离心1000rpm，5min，离心好后去上清，收集细胞沉淀
3、加入适量的无血清冻存液，将细胞沉淀吹匀分装到2ml的冻存管中
4、直接将装有细胞的冻存管放入-80冰箱
5、48小时后可转入液氮罐中保存
03、半贴壁细胞冻存步骤
1、将需要冻存的细胞悬液放入15ml离心管中
2、用PBS润洗一下贴壁细胞
3、去上清，加入适量胰酶，进行贴壁细胞消化（在这过程中时刻关注消化进度）
4、将消化下来的细胞用完全培养基终止消化，放入15ml离心管中
5、将收集到的悬浮细胞和贴壁细胞悬液分别离心1000rpm，5min
6、离心好后去上清，收集细胞沉淀
7、加入适量的无血清冻存液，将两个细胞沉淀放在一起混匀
8、分装到2ml的冻存管中
9、直接将装有细胞的冻存管放入-80冰箱
10、48小时后可转入液氮罐中保存
注意事项
1、疏松贴壁的细胞在用PBS润洗时，只能轻轻晃动，不可直接吹洗。
2、在消化过程中尽量不要消化过度。
3、根据冻存量来加入无血清冻存液，建议1ml/支。
4、冻存密度一般为一个T25长到80%左右冻存一支，或者进行细胞计数，密度在5×105-1×107/ml。
5、分装到冻存管后的细胞应及时放入-80冰箱，减少在外存放时间。
6、在-80冰箱必须存放48小时以后才可转入液氮罐中。
温馨提示
如不是使用无血清冻存液，则需提前将冻存液配置好，并且需要程序降温。
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